丹磺酰氯可用于測定肽鏈的氨基末端
丹磺酰氯是一種強(qiáng)熒光劑，可用于測定肽鏈的氨基末端，能專一地與肽鏈N端α-氨基反應(yīng)生成丹磺酰-肽，后者水解生成的丹磺酰-氨基酸具有很強(qiáng)的熒光，可直接用電泳法或?qū)游龇ㄨb定出N-端是何種氨基酸。丹磺酰氯是用于標(biāo)記蛋白質(zhì)和氨基酸的熒光試劑。
產(chǎn)品參數(shù)
別名： 丹酰氯，二甲氨基萘磺酰氯，Dansyl Chloride ，DNSCl，5-(Dimethylamino)-1-naphthalenesulfonyl chloride，
性狀： 橙黃色粉末
CAS號(hào)： 605-65-2
分子式： C12H12CINO2S
分子量： 269.74
純度： ＞98%
溶解性： 溶于丙酮
保存：2-8℃干燥。
丹磺酰氯高效液相色譜儀測氨基酸實(shí)驗(yàn)
原理：蛋白質(zhì)樣品經(jīng)酸或堿水解后再行用丹磺酰氯進(jìn)行衍生蛋白質(zhì)樣品經(jīng)酸或堿水解后再行用丹磺酰氯進(jìn)行衍生化作用溶解于流動(dòng)相溶液，用具有C8反相柱熒光檢化作用溶解于流動(dòng)相溶液，用具有C8反相柱熒光檢測器的反相液相色譜進(jìn)行測定，能很好地測定出各種測器的反相液相色譜進(jìn)行測定，能很好地測定出各種氨基酸的含量。
實(shí)驗(yàn)步驟
1、樣品處理與測定
（1）蛋白質(zhì)的水解：稱取1毫克的蛋白質(zhì)樣品或相當(dāng)于1毫克蛋白質(zhì)的樣品于玻璃管中，加入1毫升 6mol/L鹽酸后用磨口封口或燒結(jié)封口，移入110℃恒溫箱中加熱16小時(shí)，取出冷卻。用微量注射器取20微升水解樣液于小玻璃管中，加入10微升正亮氨-酸作為內(nèi)標(biāo)溶液，并在水浴中蒸發(fā)干燥。
（2）衍生物制備及其測定：將上述干燥制備的樣品加入40微升 pH=10.5 緩沖溶液，接著加入100 微升丹磺酰氯工作試劑，緊密封住管口，充分振搖15分鐘，將樣品管在100℃ 水浴中加熱2分鐘，取出冷卻。吸取1毫升以1：1的比例相混合的甲、乙兩種流動(dòng)相的混合溶液于樣品管中，充分振搖15秒，吸取10微升左右的此樣品溶液注入液相色譜柱內(nèi)，記錄色譜圖。
2、校正因子fi的確定用微量注射器吸取氨基酸標(biāo)準(zhǔn)混合溶液20微升于小玻璃管中，加入10微升正亮氨-酸作為內(nèi)標(biāo)溶液，并在水浴中蒸發(fā)干燥，然后按樣品處理中的方法制備標(biāo)準(zhǔn)氨基酸的衍生物，再加入1毫升流動(dòng)相混合溶液，用微量注射器吸取5-10微升經(jīng)衍生化的氨基酸溶液進(jìn)入色譜儀，記錄色譜圖，并確定各氨基酸的出峰保留時(shí)間和峰面積，以及測量內(nèi)標(biāo)物和各氨基酸的峰面積，并求出各氨基酸校正因子fi。
丹磺酰化法分析蛋白質(zhì) N-末端氨基酸實(shí)驗(yàn)
原理：蛋白質(zhì)的α-氨基與丹磺酰氯(DNS-Cl 是一種熒光物質(zhì)) 反應(yīng), 生成DNS-蛋白質(zhì), 經(jīng)水解可生成DNS-氨基酸。通過聚酰胺薄膜層析分析DNS-氨基酸, 可確定蛋白質(zhì)的N-末端氨基酸。此法靈敏度高, 也可用于蛋白質(zhì)的氨基酸組成的測定。聚酰胺對(duì)極性物質(zhì)的吸附作用是: 它能和被吸附物質(zhì)間形成氫鍵, 這種氫鍵的強(qiáng)弱決定了被分離物與聚酰胺薄膜之間吸附能力的大小。層析時(shí)展層劑與被分離物在聚酰胺膜表面競爭形成氫鍵。因此選擇適當(dāng)?shù)恼箤觿┦狗蛛x物在聚酰胺表面發(fā)生吸附、解吸附、再吸附和再解吸附的連續(xù)過程, 就能導(dǎo)致分離物達(dá)到分離的目的。
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